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UV1901PC紫外可見分光光度計法測發(fā)酵食品中微量乙醇的含量 

一、微量乙醇的介紹

微量乙醇是低度果酒，含酒*料和調味品等發(fā)酵食品中重要的風味物質。重鉻酸鹽氧化分光光度法測定微量乙醇含量，是一種快速準確的測定方法，它具有操作簡便，所需分析儀器簡單的特點，尤其適用于生產(chǎn)和質檢部門的日常分析。 

二、UV1901PC紫外可見分光光度計法測發(fā)酵食品中微量乙醇含量的測定原理 

在酸性溶液中，乙醇可被重鉻酸氧化生成乙酸，重鉻酸鉀中的六價鉻被還原成三價鉻，其反應式為： 3C2H5O+2K2Cr2O7+8H2SO4=3CH3COOH+2K2SO4+2Cr2(SO4)+11H2O 反應中生成的三價鉻為綠色，它在585nm處有zui大吸收峰，且溶液顏色的深淺與乙醇含量成正比，可以在分光光度計上比色，通過與標準系列進行比較進行定量。

三、UV1901PC紫外可見分光光度計法測發(fā)酵食品中微量乙醇含量的儀器與試劑 

1、UV1901PC紫外可見分光光度計(上海奧析）

 2、蒸餾裝置 

3、PHS—3C酸度計（上海雷磁廠）

 4、乙醇標準溶液：準確吸取2.00mlGR級無水乙醇，置于預先裝有少量蒸餾水的100ml容量瓶中，混勻，加水定容至刻度，搖勻備用。 

5、重鉻酸鉀溶液，稱取10.00gAR級K2Cr2O7，用少量水溶解，并定容至250ml。 

 6、濃硫酸：AR級，含量95~98%。 

 7、1%溴百里酚藍指示劑 

8、  NaoH溶液：C(NaoH)=1.0mol/L  

四、UV1901PC紫外可見分光光度計法測發(fā)酵食品中微量乙醇含量的操作方法 

1、標準曲線的繪制 

取7支25mlA級比色管，各加入2.00ml重鉻酸鉀溶液和2.50ml濃H2SO4，混勻，并冷卻，依次加入0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00和1.25ml乙醇標準溶液，混勻，反應10分鐘后加水至刻度，再次混勻，以0號管調零，于585nm波長處分別測定其吸光度，繪制標準曲線。

 表1

2、樣品的制備 

準確移取100.00ml樣品于250ml蒸餾燒瓶中,加入25mH2O,再加數(shù)滴溴百里酚藍指示劑，用NaoH溶液滴定至藍色（深色樣品用酸度計指示中和至中性），加幾粒沸石，連接好蒸餾裝置進行蒸餾，餾出液用100ml容量瓶收集，接收瓶用冰浴進行冷卻，緩慢蒸餾至接近刻度時取下，放入20℃水浴中30分鐘，用H2O定容至刻度，搖勻，備用。

3、樣品的測定 

取1.00ml制備好的樣品，按標準曲線繪制的方法進行測定，利用回歸方程計算出樣品中乙醇的含量。

 五、UV1901PC紫外可見分光光度計法測發(fā)酵食品中微量乙醇含量的結果與討論 

1、波長的選擇 

吸取1.25ml乙醇標準溶液按上述測定方法進行操作，并在UV1901PC紫外可見分光光度計上400~800nm波長范圍內對樣液進行掃描，掃描結果表明，該體系在585nm波長隨近有zui大吸收峰，并且試劑空白值在該波長處很低，故選擇λ=585nm作為測定波長。 

2、濃H2SO4用量對吸光度的影響 

按反應式計算，確保2.00ml重鉻酸鉀溶液全部參加反應，約需0.6ml98%的濃H2SO4，實際工作中，為確保反應迅速、*，濃H2SO4用量常常過量。在固定重鉻酸鉀溶液用量和反應時間的前提下，在一定范圍內混合體系的吸光度隨濃H2SO4用量的增加而增加，當濃H2SO4用量超過2.50ml時，吸光度趨于穩(wěn)定，故選擇濃H2SO4用量為2.50ml。 

3、顯色時間與穩(wěn)定時間  按照試驗方法測定同一樣液在不同時間的吸光度值，結果表明，混合體系的吸光度在顯色10分鐘后至至少6小時以內基本保持穩(wěn)定。 

4、方法精密度 

測定次數(shù)  對麥精啤露樣品重復6次測定，變異系數(shù)為1.12% 

5、靈敏度與線性范圍 

該分析方法的檢出限為0.05%，乙醇含量在0~25ul/25ml范圍內呈顯著的線性關系。  

6、樣品測定及回收率  

用本方法對監(jiān)督檢驗抽取的含酒*料、醬油、低度山葡萄酒等多組樣品進行測定，加標回收率在96.0~100%之間，測定結果令人滿意